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喹諾酮類快速檢測試劑盒操作步驟說明書
更新時間:2020-09-19 點擊量:2246

 

喹諾酮類

快速檢測試劑盒說明書

一、原理

    試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物喹諾酮類藥物和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗喹諾酮類藥物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留喹諾酮類藥物的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物喹諾酮類藥物的含量。

二、試劑盒特性

  • 試劑盒靈敏度:      0.1ppb
  • 孵育溫度:          25℃
  • 孵育時間:          30min~15min
  • 樣本檢測下限

組織 、血清 ········································  1ppb

  • 交叉反應(yīng)率

恩諾沙星(ENR)   ··························    100%

環(huán)丙沙星(CIF)   ····························    100%

氧氟沙星(OFL)    ··························    60%

奧索利酸(OXO)  ···························  116.86%

達(dá)氟沙星(DAN)  ···························  102.63%

諾氟沙星(NOR)  ···························  148.65%

洛美沙星(LOM)  ··························   86.24%

培氟沙星(PEF)   ··························  156.60%

依諾沙星(ENO)  ···························   98.97%

氟喹酸(FLU)    ···························   96.73%

麻保沙星(MAR)  ··························  110.63%

氨氟沙星(AMI)  ···························   98.86%

那氟沙星(NAD)  ···························   56.81%

  • 樣本回收率

組織、血清 ·································     85±20%

三、試劑盒組成

1

微量測試孔

每條8孔,一板12條

2

標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶

(1ml/瓶)

0ppb

0.1ppb

0.3ppb

0.9ppb

2.7ppb

8.1ppb

3

酶標(biāo)記物

7ml

紅色帽

4

抗體工作液

7ml

藍(lán)色帽

5

底物A液

7ml

白色帽

6

底物B液

7ml

黑色帽

7

終止液

7ml

黃色帽

8

20X濃縮洗滌液

40ml

白色帽

9

20X濃縮復(fù)溶液

50ml

透明帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器微孔酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)

微量移液器:單道 20~200ul、單道100~1000ul、多道 250 ul

五、樣本前處理步驟

  • 樣本處理前須知

處理任何樣本時,都必須注意:

(a) 實驗中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時要更換吸頭。

(b) 實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實驗結(jié)果。

  • 樣本前處理需配制:

配液1  樣本復(fù)溶液 

將20X濃縮復(fù)溶液用去離子水按1:19(1份濃縮復(fù)溶液+19份去離子水)進(jìn)行稀釋。

  • 樣本處理:

a)組織樣本處理方法

1、稱1.0±0.05g 均質(zhì)過的組織樣本于50ml離心管中;

2、加入10ml樣本復(fù)溶液,振蕩3min,4000r/min以上,15℃離心10min;

3取上清50µl液體用于分析。

     樣本稀釋倍數(shù):10

b)血清樣本處理方法

  • 50µl澄清的血清,加入450µl 樣本復(fù)溶液混合,混勻30S(如果血清樣本渾濁,將樣本于10,4000r/min以上離心10min,分離出血清或過濾血清,直至得到澄清的樣本);
  • 50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  10  

六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

  • 測定前應(yīng)須知:
  • 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(20-25℃)。
  • 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。
  • 在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
  • 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
  • 操作步驟:
  • 將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出,置室溫(20-25℃)平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
  • 按需要取出微孔條及板架,將不用的微孔板重新密封,保存于2-8℃,不要冷凍。
  • 配液:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。
  • 編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品均需做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔的樣本孔所在的位置。
  • 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl /孔,然后加酶標(biāo)記物50μl/孔,再加入抗體工作液50µl/孔。輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板,25℃環(huán)境反應(yīng)30min。
  • 用洗滌液按每孔250μl洗板4-5次,每次浸泡15-30秒,拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
  • 顯色:每孔加入底物A液50µl再加入底物B液50µl,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境避光顯色15min。
  • 測定:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)),測定吸光度值(OD值)。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含喹諾酮類藥物量成負(fù)相關(guān)。

1、粗略判定:

    用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)品比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.238, 樣本2的吸光度值為0.946,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為1.845; 0.1ppb為1.542;0.3ppb為1.130; 0.9ppb為0.635;2.7ppb為0.326; 8.1ppb為0.156。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb - 8.1ppb;樣本2的濃度范圍是0.3ppb - 0.9ppb。乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中喹諾酮類藥物的實際濃度。

2、定量分析

(1)百分吸光率的計算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第--個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光(%)=

B

×100%

B0

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以喹諾酮類標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中喹諾酮類藥物實際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

八、 注意事項

  • 室溫低于25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(20-25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
  • 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
  • 混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
  • 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
  • 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。
  • 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
  • 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質(zhì)。
  • 該試劑盒*佳反應(yīng)溫度為25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲藏條件和保質(zhì)期

  • 儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,不要冷凍。
  • 保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實驗結(jié)果,請放心使用。

 

 

實驗代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

HE染色

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化IHC染色

熒光定量PCR

動物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測

免疫熒光染色

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

石蠟/冰凍切片

透射電鏡服務(wù)

掃描電鏡實驗

蛋白雙向(2-D)

動物實驗

免疫共沉淀

原位雜交(FIsh)

蛋白質(zhì)純化

分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

 

蛋白雙向2D-WB

 

藥理毒理動物實驗

 

番紅O固綠染色

明膠酶譜MMP

酶活性檢測

動物造模/模型實驗服務(wù)

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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